5-基异噁唑-3-甲酸乙酯的应用_凯茵工业添加剂

背景及概述^[1][2]

5-基异噁唑-3-甲酸乙酯是一种有机化学中间体，可由乙炔或2，4-二氧代-4-基丁酸乙酯作为起始原料制备得到。

制备^[1-2]

方法一、

乙炔(20g，0.2mol)和硝基(66.4g，0.5mol)溶解在500毫升氯仿中，然后加入11.2克三亚乙基二胺(DABCO，0.1摩尔)。溶液加热到70℃反应72小时。冷却到室温，加入200毫升水稀释，碳酸氢钠水溶液(100mL)，饱和食盐水(100mL)。有机相收集，干燥，移除溶剂，粗产品柱层析纯化(石油醚∶＝300∶1)得到30克化合物93-a(产率71％)。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)：δ1.41-1.45(t，J＝7.0Hz，3H)，4.43-4.48(m，2H)，6.91(s，1H)，7.46-7.49(m，3H)，7.78-7.81(m，2H)。

方法二、

原料2，4-二氧代-4-基丁酸乙酯(1g，4.54mmol)溶于20ml无水乙醇，分批加入盐酸羟胺(0.63g，9.08mmol)，回流反应2h，反应完，将反应液倒入50ml水中，(20ml×3)萃取，合并有机相，以饱和食盐水(15ml×2)洗涤，无水钠干燥，过滤，滤液减压蒸除 溶剂，得白色固体0.6g，熔点59-60℃，收率60.7％。¹H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ：7.98，7.96(dd，J＝1.31，7.44Hz，2H，ArH)，7.57-7.52 (m，3H，ArH)，7.49(s，1H，ArH)，4.40(q，J＝7.11Hz，2H，-OCH2)，1.35(t，J＝7.11Hz，3H，- CH3).

应用^[1]

可用于制备化合物93。使用12孔板提前养MDCK细胞至约90％密度。将WSN病毒稀释至50PFU浓度，分别加入实施例化合物93混合并用金刚烷胺和达菲作为对照药物，以不同的浓度按梯度(100μM、50μM、25μM、10μM、5μM、2.5μM、1μM、0.5μM、0.25μM和0.1μM)分别加入MDCK细胞中孵育30分钟，将孵育后的病毒液吸出与琼脂和2×DMEM混合。然后将混合液加入孔板中，培养约48小时。加入结晶紫固定染色。选取实验中抑制空斑出现的浓度梯度中小浓度作为空斑实验小抑制浓度，用于定量测定化合物抑制病毒效果。结果表明本发明化合物93对病毒感染的抑制效果远强于金刚烷胺，并且化合物93、达菲和金刚烷胺在100μM都未显现的任何细胞毒性作用。

主要参考资料

[1] CN201410056606.7 抗病毒化合物、其制备方法和用途

[2] CN201510432499.8 新型联杂环类衍生物、其制备方法及其作为药物的用途